蛋白印迹仪(Western Blot System)是一种用于检测和分析特定蛋白质的实验设备。其原理包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(分离蛋白质)、转膜(将蛋白质转移到固相载体,如NC膜或PVDF膜)、抗体孵育(特异性抗体与目标蛋白结合)、显色反应(标记的二抗与底物反应,显示目标蛋白)。
蛋白印迹仪广泛应用于生物医学研究(如蛋白质表达分析、细胞信号通路研究)、临床诊断(如HIV感染确认、自身免疫性疾病检测)、药物研发(如生物标志物发现、蛋白质相互作用研究)等领域。其优势在于高灵敏度和特异性,能够定量和定性分析蛋白质。
使用规范与注意事项:
1、实验准备:
样本需充分裂解,定量后上样(避免过载导致条带模糊)。
预制胶需平衡至室温,避免冷凝水影响电泳。
2、转膜优化:
PVDF膜需甲醇激活,NC膜需缓冲液浸润。
转膜时间根据蛋白分子量调整(如100kDa蛋白需1.5小时)。
3、抗体孵育:
一抗浓度需预实验确定,4℃过夜孵育效果佳。
二抗需避光保存,现用现配。
4、设备维护:
定期清洁电泳槽和转印电极,防止蛋白残留。
校准成像系统的光强和曝光时间,确保定量准确性。